EXPERIMENTO 2
PUNTO ISOELECTRICO DE AMINOACIDOS Y PROTEÍNAS
Objetivos:
- Determinar los pKa de un aminoácido polar con carga y un aminoácido no polar, mediante titulación con álcali.
- Estimar el punto isoeléctrico de los aminoácidos polares y no polares del gráfico de pH vs volumen de base.
- Determinar el punto isoeléctrico de una proteína mediante la técnica de precipitación.
Introducción:
El punto isoeléctrico se define como el pH en el cual el número de cargas positivas se iguala al número de cargas negativas que aportan los grupos ionizables de una molécula. En el punto isoeléctrico la carga neta de la molécula es cero (0). En los aminoácidos los grupos ionizables corresponden a grupos carboxilos, amino, fenólicos y tiólicos.
Aminoácido | Abrev | Letra | pKa1 | pKa2 | pKa3 |
Glicina | Gly | G | 2.35 | 9.78 | |
Alanita | Ala | A | 2.35 | 9.87 | |
Valina | Val | V | 2.29 | 9.74 | |
Leucina | Leu | L | 2.33 | 9.74 | |
Isoleucina | Ile | I | 2.32 | 9.76 | |
Metionina | Met | M | 2.13 | 9.28 | |
Prolina | Pro | P | 1.95 | 10.64 | |
Fenilalanina | Phe | F | 2.20 | 9.31 | |
Triptofano | Trp | W | 2.46 | 9.41 | |
Serina | Ser | S | 2.19 | 9.21 | |
Treonina | Thr | T | 2.09 | 9.1 | |
Asparragina | Asn | N | 2.14 | 8.75 | |
Glutamina | Gln | Q | 2.17 | 9.13 | |
Tirosina | Tyr | Y | 2.20 | 9.21 | 10.46 Fenol |
Cisterna | Cys | C | 1.92 | 10.7 | 8.37 Sulfhidrilo |
Lisina | Lys | K | 2.16 | 9.06 | 10.54 ε-Amino |
Arginina | Arg | R | 1.82 | 8.99 | 12.48 Guanidinio |
Histidina | His | H | 1.80 | 9.33 | 6.04 Imidazol |
Acido aspáratico | Asp | D | 1.99 | 9.90 | 3.90 β-COOH |
Acido glutámico | Glu | E | 2.10 | 9.47 | 4.07 γ-COOH |
Los aminoácidos y las proteínas son menos solubles en su punto isoeléctrico si las demás condiciones permanecen iguales. Esto se debe a que los iones dipolares no presentan carga neta y cristalizan en forma de sales insolubles a ese pH.
Materiales y reactivos:
ác. glutámico
Tras inhalación: aire fresco.
Tras contacto con la piel: Lavar con agua.
Tras contacto con los ojos: aclarar con agua.
Tras ingestión (grandes cantidades): consultar al médico si subsiste malestar
glicina al 0.5%
Inhalación: Trasladar al afectado al aire fresco
Nauseas, vómitos, diarrea, tos, dificultad respiratoria, dolores
abdominales.
Condiciones médicas que se verán agravadas con la exposición
al producto:
Quitar la ropa contaminada y lavar en forma abundante la
piel con agua fría y jabón.
H Cl 0.1M
inhalación produce irritación de las mucosas, dolores retroesternales
y epigástricos, edema pulmonar y de laringe.
ojos produce irritación y quemaduras que pueden producir opacidad de córnea, en algunos casos de carácter irreversible.
Peligros para el medio ambiente: Puede afectar la vida animal y vegetal por su carácter ácido, en función de la concentración y tiempo de exposición.
NaOH 0.2M
Inhalación: La inhalación de polvo o neblina causa irritación y daño del tracto respiratorio. En caso de exposición a concentraciones altas, se presenta ulceración nasal.
A una concentración de 0.005-0.7 mg/m se ha informado de quemaduras en la nariz y tracto. En estudios con animales, se han reportado daños graves en el tracto respiratorio, después de una exposición crónica.
etanol
Inhalación:
Los efectos no son serios siempre que se use de manera razonable. Una inhalación prolongada de concentraciones altas (mayores de 5000 ppm) produce irritación de ojos y tracto respiratorio superior, náuseas, vómito, dolor de cabeza, excitación o depresión, adormecimiento y otros efectos narcóticos, coma o incluso, la muerte.
éter
Es un líquido inflamable, muy volátil y que puede formar peróxidos explosivos, por lo que existe
un alto riesgos de fuego y explosión. Los vapores pueden llegar a un punto de ignición, prenderse y
transportar el fuego al lugar que los originó, además pueden explotar si se prenden en un área cerrada.
Además, debido a que su punto de autoignición es bajo y puede generar electricidad estática, debido a
que no es conductor, el riesgo de incendio o explosión aumenta.
Las mezclas aire-éter que contengan mas de 1.85 % en volumen de este último, son
explosivamente peligrosas. Por otra parte, al agitar éter anhidro puede generar suficiente electricidad
estática como para iniciar un incendio.
Diseño experimental
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